腺病毒ADV

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腺病毒（Adenovirus, ADV）是一种无包膜的线性双链DNA病毒，具有广泛的细胞和组织感染能力。感染过程剧烈，适于短时间内进行基因高表达的实验，与其它病毒相比，腺病毒优势在于插入片段较长，表达活性强。

　　体外应用时，腺病毒载体转基因效率高（接近100%的转导效率），且可转导不同类型的细胞，对于大量难转染细胞的基因递送是一个很好的工具。但是，在体内应用时，由于腺病毒免疫原性强，感染剧烈，故常会引起动物局部组织炎症反应和机体免疫反应，对动物体征和实验结果的客观性造成影响。

ADV包装和侵染过程

腺病毒包装与纯化

　　腺病毒包装骨架达质粒与穿梭质粒共转染HEK-293细胞，待细胞出现CPE状态后通过收集细胞上清和细胞裂解物，通过浓缩或氯化铯密度梯度离心纯化病毒。

　　CPE（Cytopathic Effect）：病毒对组织培养细胞侵染后产生的细胞变性，利用此种病变效应可进行病毒定量。

腺病毒滴度检测

　　检测方法：酶联免疫法腺病毒滴度测定，根据计算感染后染成褐色的阳性细胞数，来计算病毒滴度。
实验原理：腺病毒感染的阳性细胞表达的衣壳蛋白被染成褐色。
检测方法：免疫显色方法
实验原理：通过抗5型腺病毒外壳蛋白的单抗与待感染腺病毒样品的细胞结合，再用HRP标记的二抗与一抗结合，经显色液显色，被感染的细胞变成褐色，根据阳性细胞数，来计算病毒滴度。

腺病毒载体优势

① 表达快，腺病毒感染细胞后，1-2天即可表达
② 载体容量大，感染效率高，常用于感染难感染的细胞
③ 不整合到染色体中，无插入致突变性
④ 具有嗜肝性，易于感染肝细胞，腺病毒的体内应用是用于感染肝脏

　不过由于腺病毒免疫原性高，对某些对外源刺激敏感的动物模型和组织中易造成炎症，体内应用需谨慎。

不同病毒的生物学特性比较

载体选择

　　K8凯发生物拥有丰富的腺病毒产品，用于操作编码基因和非编码基因，如lncRNA、microRNA、circRNA。
以下腺病毒载体可供您选择：

调控方式	载体编号	载体名称（载体元件顺序）	真核抗性	荧光	启动子	默认标签	载体容量
过表达	H225	pADV-mCMV-MCS-3xFLAG	N/A	N/A	mCMV	3FLAG	>6kb
	H201	pADV-mCMV-EGFP-3xFLAG	N/A	EGFP	mCMV	3FLAG	>5kb
	H213	pADV-mCMV-3xFLAG-EGFP	N/A	EGFP	mCMV	3FLAG	>5kb
	H221	pADV-mCMV-3xFLAG-P2A-EGFP	N/A	EGFP	mCMV	3FLAG	>5kb
	H204	pADV-mCMV-mCherry-HA	N/A	mCherry	mCMV	HA	>5kb
	H222	pADV-mCMV-3xFLAG-T2A-mCherry	N/A	mCherry	mCMV	3FLAG	>5kb
	H12588	pADV-EF1-mNeonGreen-CMV-MCS-3xFLAG	N/A	mNeonGreen	CMV	3FLAG	>4kb
	H12589	pADV-EF1-mScarlet-CMV-MCS-3xFLAG	N/A	mScarlet	CMV	3FLAG	>4kb
circRNA过表达	H6946	pADV-CMV-S-circRNA	N/A	N/A	CMV	N/A	>5kb
miRNA过表达	H216	pADV-U6-miR30(miRNA)-CMV-EGFP	N/A	EGFP	U6	N/A	N/A
表达cre	K0024	pADV-CMV-Cre	N/A	N/A	CMV	N/A	N/A
干扰	DKD001	pADV-U6-shRNA-CMV-EGFP	N/A	EGFP	U6	N/A	N/A
干扰	DKD004	pADV-U6-shRNA-CMV-mCherry	N/A	mCherry	U6	N/A	N/A
CRISPR敲除	H5064	pADV-U6-spgRNA v2.0-CMV-3xFLAG-spCas9	N/A	N/A	U6	3FLAG	N/A
	H9350	pADV-U6-spgRNA v2.0-CMV-sfGFP-P2A-3xFLAG-spCas9	N/A	sfGFP	U6	3FLAG	N/A
	H5066	pADV-U6-spgRNA v2.0-CMV-EGFP	N/A	EGFP	U6	N/A	N/A
	H218	pADV-CMV-mCherry-P2A-3xFLAG-spCas9	N/A	mCherry	CMV	3FLAG	N/A
	H5449	pADV-CMV-mCherry-P2A-3xFLAG-eSpCas9_1.1	N/A	mCherry	CMV	3FLAG	N/A

应用实例

　　1.Hepatology. (IF=14.079). Zhou YF,et.al. (2018). Cystathionine β-synthase is required for body iron homeostasis. [腺病毒, 肝脏]

　　感染部位：肝脏

　　载体名称：Ad-CBS

　　注射方式：尾静脉

　　注射量：1 x10¹¹PFU/mL，10ul

　　检测时间：7天

　　2. Diabetes. (IF=8.095). Xiao Y Z,et.al. (2015). Activation of ERK1/2 ameliorates liver steatosis in leptin receptor deficient (db/db)mice via stimulating ATG7-dependent autophagy. [腺病毒, 肝脏]

　　感染部位：肝脏

　　载体名称：Ad-ATG7

　　注射方式：尾静脉

　　注射量：1 x10⁹PFU /只

　　检测时间：10天

　　3. Molecular Neurobiology. (IF=5.397). Guo J,et.al. (2015). Overexpression of Fibulin-5 Attenuates Ischemia/Reperfusion Injury After Middle Cerebral Artery Occlusion in Rats. [腺病毒, 大鼠]

　　注射部位：大鼠大脑皮层

　　载体名称：Ad-FBLN

　　注射方式：脑立体定位注射

　　注射量：三种不同剂量

　　检测时间：7天

　　K8凯发生物腺病毒的生产和质控采取了国际学术界公认的标准流程，采用AdEasy及Admax腺病毒包装系统在HEK-293细胞中进行包装。所获得的病毒颗粒经过超速密度梯度离心和过滤，并通过壳蛋白免疫法进行滴度测定。一般情况下腺病毒的滴度在10¹⁰~10¹¹pfu/ml，完全可以满足各类实验的使用要求。

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